[关键词] 学；药物；实验教学；改革
[中图分类号] G420[文献标识码] C[文章编号] 1673-7210（2012）04（b）-0162-02
生物药剂学与药物动力学是药剂学的分支学科，是药学、药物制剂等专业的重要专业课。生物药剂学与药物动力学由生物药剂学与药物动力学两部分组成，其中，生物药剂学是研究药物及其剂型在体内的吸收、分布、代谢与排泄过程，阐明药物的剂型因素、机体生物因素和药物疗效之间相互关系的科学；而药物动力学是应用动力学的原理与数学处理方法， 定量描述药物通过各种途径进入机体的吸收、分布、代谢和排泄过程的动态变化规律的科学[1-2]。生物药剂学与药物动力学课程分为理论课与实验课两部分，其实验课的教学目的是使学生更好地掌握药生物药剂学与药物动力学基本理论，侧重于培养学生的动手能力及发现问题、解决实际问题的能力，提高学生的综合素质。由于生物药剂学与药物动力学实验涉及药物分析、药理学等多学科知识，实验操作复杂、影响因素多，学生对诸如给药、取样、样品处理等方面的知识较为生疏，不能熟练应用，实验结果与预期存在较大差距，实验效果不理想。为扭转这一现象，我院从教材编写、教学方法、实验内容、分组模式等方面对生物药剂学与药物动力学实验进行改革，并获得了较好的效果。
1 实验教学改革内容
1.1 编写生物药剂学与药物动力学实验教材
我校自2003年起在药学、药物制剂、制药工程、药学专升本等专业开设生物药剂学与药物动力学课程，理论课采用人民卫生出版社《生物药剂学与药物动力学》教材，而生物药剂学与药物动力学实验内容大多散在药剂学实验教材中，内容凌乱、不系统，缺乏专门的生物药剂学与药物动力学实验教材，因此，编写适应我院实际情况的生物药剂学与药物动力学实验教材成为当务之急。我院组织学科教师，一方面借鉴开设该门课程较早、课程体系较完善的院校如沈阳药科大学、中国药科大学的实验教材，另一方面结合我院实际教学情况如实验课学时安排、实验条件等，确定了涵盖血药法、尿药法，血管外、血管内等给药形式，选定磺胺甲基异恶唑的小肠吸收、愈创木酚甘油醚血管外给药的药物动力学研究、对乙酰氨基酚、氨茶碱静脉注射给药的药物动力学研究、尿药法测定片剂的生物利用度等经典试验项目。经过带教老师严格的预实验，确定实验方法。考虑到学生对动物实验技能的欠缺，我院将常用给药方法如大鼠、家兔的静脉注射、灌胃等操作要点、取样技巧、血浆、血清分离等内容图文并茂收入其中，教材强调实验操作中的细节和注意事项，文字简练、 易懂， 重点突出。。
1.2 改革生物药剂学与药物动力学实验课授课方式
传统实验课授课一般分为两个阶段，首先由实验课代课教师讲解实验中的相关问题、注意事项、实验分组等内容，该阶段多采用板书讲解结合课堂提问方式；其次为实验操作环节。在这种授课模式下，学生对所做实验内容一知半解，甚至对每步操作均需 “按图索骥”，对所需实验设备及操作知之甚少，对出现的问题更是不知所措，很难达到预期的实验目的。针对这种情况，经学科教师讨论分析，并借鉴其他实验课教学经验，我院对生物药剂学与药物动力学实验课教学方式进行了改革。首先，我院将课前预习、查阅资料、课堂讨论等形式引入实验课教学，在此阶段教师引导学生对实验原理、注意事项、数据处理方法等内容进行自主学习，提出问题、解决问题，强化学生对实验课内容的认识。采用启发式教学，将临床治疗药物监测、给药方案设计等内容引入，激发学生的学习兴趣。如我院将个体差异大、安全指数低的氨茶碱、苯妥英钠等药物临床使用原则介绍给同学，让学生把抽象的药物动力学参数与临床用药相衔接，对药物动力学研究目的有更深刻的认识，能够更加认真地学习该门课程[3]。。实践证明，新的授课方式激发了学生的学习兴趣， 调动了学生的积极性和主动性，学生由被动学习转变为主动学习，达到了学习知识、运用知识、解决实际问题的目的。
1.3 科学选定实验内容
生物药剂学与药物动力学重点讲授由尿药数据、血药数据获取药物动力学参数，给药途径包括静脉注射、静脉滴注、血管外给药等，考虑到我院生物药剂学与药物动力学实验课学时较少（一般为10-20个学时），结合我院分析测试仪器状况，最终选定氨茶碱静脉注射给药的药物动力学研究、愈创木酚甘油醚血管外给药的药物动力学研究、尿药法测定片剂的生物利用度等试验项目。
1.4 改革实验分组模式
传统实验课多采用分组实验，一般为两人一组，考虑到生物药剂学与药物动力学实验操作的复杂性，我院改为将学生结成8-10人小组进行实验。每组由组长组织小组成员列出所需实验器材、梳理整个实验操作、强化关键步骤，并对小组成员进行分工，共同完成实验。该模式应用在氨茶碱血药浓度测定与药物动力学的研究及愈创木酚甘油醚体内药物动力学研究等试验项目，取得了良好的教学效果，不仅使学生将课堂上所学理论知识在实践中运用，同时强化了其分工协作、团队意识，为学生将来工作或学习打下基础。
1.5 改革实验数据处理方法
目前，计算机软件已广泛应用于生物药剂学与药物动力学数据处理，改革原有的数据处理模式成为必然。首先，将Microsoft Excel 2003软件应用于药物动力学数据统计运算，代替以往学生采用计算器计算，通过教师演示、指导学生应用，过渡到学生熟练掌握并进行数据处理。其次，药动学计算软件已广泛应用于新药开发研制、药动学分析及临床药动学计算，药学类本科毕业生尤其是药物制剂专业的学生迫切需要学习该类软件的使用[5-6]。我院将药动学计算软件介绍给学生，通过例题演示该软件的使用方法，然后让学生实际应用，输入浓度――时间数据，判断房室模型，求药物动力学参数，为学生今后的学习和工作打下了良好的基础。
1.6 生物药剂学与药物动力学实验课教学效果
自从生物药剂学与药物动力学实验教学改革以来， 。
2 生物药剂学与药物动力学实验教学改革体会
经过多年的教学实践，我院在生物药剂学与药物动力学实验教学中进行了改革实践。编写实验教材、收录相关研究内容，拓宽了学生的知识面，教材内容丰富， 信息量充足，利于学生对知识的理解和掌握，得到学生好评；改革实验课授课方式，将课前预习、查阅资料、课堂讨论及多媒体教学引入实验课教学，调动了学生学习的积极性和主动性；将学生结成8~10人小组进行实验，强化了学生分工协作、团队意识；将药动学计算软件应用于药物动力学数据统计运算，为学生今后的学习和工作打下了良好的基础。我院开设生物药剂学与药物动力学实验课以来，虽取得了一点成绩，但仍存在不足，今后仍需不断提高教学水平。
[参考文献]
[1]王岩，周毅生，崔升淼，等.中药学专业开设生物药剂学与药物动力学课程的探索与实践[J].成都中医药大学学报：教育科学版，2010，12（4）：25-26.
[2]李见春，吴华璞.谈《生物药剂学与药物动力学》教学体会[J].中国当代医药，2010，17（13）：137-138.
[3]刘德胜，代现平，陈向明，等.生物药剂学与药物动力学教学改革与实践[J].山西医科大学学报，2010，12（7）：700-702.
[4]李小娜，李唐棣，吕立勋.生物药剂学与药物动力学教学改革探讨[J].当代教育论坛，2010，3：25-26.
关键词：生物药剂学与药物动力学；课程改革；深入思考
中图分类号：G2.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2013）18-0167-02
。我校的办学理念是“计量立校、标准立人、质量立业”，在计量、质量、检测、标准等方面具有鲜明的办学特色，因此我校药学教育应在“定量药学”、“标准药学”等方面有所体现，将数学模型理念与药学、生物学相融合，共同促进我校药学科的发展，同时也丰富、完善和延伸我校的“质量、标准”办学理念和特色。因此，作为“定量药学”和“计量药学”核心课程的《生物药剂学与药物动力学》，教学模式必须进行不断改革与创新，增强学生学习的积极性，培养具有我校特色的药学人才。《生物药剂学与药物动力学》是药学专业一门非常重要的专业课，国内外药学类专业一门必修课，该门课程在我校已开设5年。本门课程主要研究药物及其剂型在体内的吸收、分布、代谢与排泄过程，阐明药物的剂型因素、机体因素和药物疗效之间相互关系的科学。同时利用动力学的原理与数学处理方法，定量描述药物通过各种途径进入体内后体内作用过程的动态变化规律的科学，为新药设计、药物质量评价及指导临床合理用药提供了基本理论和基本方法。掌握本课程内容，将为进一步学习临床药代动力学及从事新剂型新制剂研发和临床药学工作打下坚实的理论基础。传统药学主要是经验药学，大多主要研究药物的活性，偏向于定性研究。随着社会的进步，药学的发展最终要走向定量药学，以更加精确、量化的方式来研究和创制新药。作为药学专业的一门骨干课程，《生物药剂学与药物动力学》则主要是利用现代生物学和数学模型手段来开展外源化合物在生物体内动态变化过程，对药物在机体内的过程进行“量化”，以此来定量评价药物的生物学活性及制定安全、有效的给药方案。对于生物药剂学和药物动力学的教学改革和探索，目前国内外相关高校和专业均进行了探索。国内有高校教师对近3-5年的药学学生进行了问卷调查，结果发现大部分学生认为此门课程比较难学，且药物动力学部分含有较多的高等数学公式，涉及公式推导、药物动力学参数计算等内容，而这些内容又是大一所学内容，同时对于高等数学本身又是生物、医药类专业的薄弱环节，因此如何提高这部分内容的讲解及让学生迅速接受并将其应用于药物动力学课程学习是药物动力学部分的主要问题。。在国外的教学方面，北美和日本的药学院非常重视调整和改革生物药剂学与药物动力学的教学内容。。
1.理论教学体系的改革与创新。改变传统纯粹的教师在上面说，学生在下面听的说教形式，鼓励学生自主学习、探知能力，将其研究成果以论文的形式发表，增加学生的成就感。。其次，在一些重要章节理论教学过程中，采用Seminar学术讨论会的模式，让学生利用所学文献检索知识，自己查找国内外与本课程紧密相关的重要期刊文献，分组讨论，并写出读书报告，以此培养学生的阅读能力、探索能力及写作能力，作为学生的平时成绩。
2.实践教学体系的改革与创新。首先，基于校级开放实验项目、校课外科技活动、新苗人才计划以及学科竞赛等课外实践活动，将其中比较成熟的实验项目编入实验指导书中，同时与药物“毒物代谢动力学”紧密结合，编撰出一部特色的、多课程联合的实验指导教程。其次，以“产学研项目”和“科研项目”为基础，构建紧密的实习基地，构建“互惠互利”的长期机制。。
3.教学方法和手段的改革。。
4.课程考核体系的改革。《生物药剂学与药物动力学》是一门理论与实践性很强的课程，而且涉及到高等数学、药理学、药物分析学、药物化学、药剂学等多学科，因此除了在理论和实践方面加强改革外，在考核部分也应建立相应的配套体系，以此来评价教学效果。改变传统的卷面成绩+实验成绩+平时成绩的考核模式，增加平时成绩的权重，将学生制作的小软件、综述、实验设计、读书报告等内容均作为其平时成绩的一部分，激励学生理论知识与实践知识的有机结合。
《生物药剂学与药物动力学》在我校药学专业开设已满5年，五年来在每一届学生的教学过程中，均对其教学内容、教学方法进行梳理和改进，并对相关课程改革进行了前期探索，收到了良好的效果，根据05-08届药学专业学生反馈信息的收集、整理，我校教师初步体会到了本课程在教学内容、教学方法以及考核方式上的共性问题，准备针对这些共性问题提出改进措施，为以后课程教学改革提供参考。因此，在对该门课程教学改革进行深入探索与思考基础上，提出切实可行的改革措施和思路，并努力将改革思路付诸实施，为我校药学专业发展提供教学思路。
参考文献：
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[2]李小娜，李唐棣，吕立勋.生物药剂学与药物动力学教学改革探讨[J].当代教育论坛，2010，（3）：25-26.
[3]李安良，吴艳芬.应用生物药剂学与药物动力学[M].北京：化学工业出版社，2006：417-490.
[4]林以宁，马世平.日本6年制药学教育的实习模式及特点[J].药学教育，2008，24（4）：60-62.
项目资助：中国计量学院重点建设课程项目资助；中国计量学院研究生教改项目资助
【关键词】药物代谢物 药代动力学 生物等效性
新药的临床药代动力学研究旨在阐明药物在人体内的吸收、分布、代谢和排泄的动态变化规律。对药物上述处置过程的研究，是全面认识人体与药物间相互作用不可或缺的重要组成部分，也是临床制定合理用药方案的依据。生物等效性是指药学等效制剂或可替换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分吸收程度和速度的差异无统计学意义。通常意义的生物等效性研究是指用生物利用度研究方法，以药代动力学参数为终点指标，根据预先确定的等效标准和限度进行的比较研究。药物的代谢物是指药物进入机体后，部分药物经过体内的生物转化，经过I相（氧化、还原、水解）和II相（结合）代谢途径，产生的化合物。本文对药物代谢物在药代动力学及生物等效性评价中需要考虑的一些问题进行综述。
1 药物的代谢产物在药代动力学评价中的一般考虑
SFDA指出[1]，根据非临床药代动力学研究结果，如果药物主要以代谢方式消除，其代谢物可能具有明显的药理活性或毒性作用，或作为酶抑制剂而使药物的作用时间延长或作用增强，或通过竞争血浆和组织的结合部位而影响药物的处置过程，则代谢物的药代动力学特征可能影响药物的疗效和毒性。对于具有上述特性的药物，在进行母体药物单次给药、多次给药的药代动力学研究时，应考虑同时进行代谢物的药代动力学研究。
FDA指出[2]，一般情况下，对于仅在人体中出现的代谢产物，或人体中代谢物水平远高于任何经过测试的动物种属时，应考虑进行安全性评估。在人体中的代谢产物，如果其水平高于稳态时母体药物系统暴露量的10%，则可引起安全性担忧。
因此，在药代动力学研究中：⑴如果代谢物影响药物的安全性和有效性，则需要检测母体药物和代谢物。⑵如果代谢物的活性不清楚，则如果代谢物水平高于稳态时母体药物系统暴露量的10%时，则需要检测母体药物和代谢物；如果代谢物水平低于于稳态时母体药物系统暴露量的10%时，一般只测定母体药物。⑶母体药物体液浓度很低，代谢物为体内的主要存在形式时，如果母体药物可测到，应测定母体药物和代谢物。⑷ 对于前体药物，如果能测到母体药物浓度，则应测定母体药物和代谢物浓度；如果母体药物浓度非常低，检测非常困难，则测定代谢物。
2 药物的代谢产物在生物等效性评价中的一般考虑
SFDA指出[3]，某些药物在体内迅速代谢无法测定生物样品中原形药物，也可采用测定生物样品中主要代谢物浓度的方法，进行生物利用度和生物等效性试验。
FDA指出[4]，对于生物等效性研究，一般建议只测量从该制剂中释放的原型药物，而不测量代谢产物。
这一建议的依据是原型药物的浓度时间曲线对制剂表现的变化比代谢产物更加敏感，代谢产物更多地是反映了代谢产物的形成、分布和消除。下列情况属于例外，⑴原型药物浓度太低，不能在足够长的时间内对血液、血浆或血清中的原型药物进行可靠测定时，最好是测定代谢产物。⑵代谢产物可能在肠壁或经进入体循环之前的其他代谢形成。如果代谢产物对安全性和/或疗效有一定的贡献，建议代谢产物和原型药物都要测定。如果代谢产物的相对活性低，对安全性和/或疗效没有什么意义，那么不一定需要测定代谢产物。 转贴于
生物基质中活性物质浓度太低以至于无法准确检测，并导致显著变异时。此时，申办者应提供令人信服的证据说明母体化合物的检测不可靠，才能使用代谢物数据。⑵ 当代谢物活性是体内活性物质总活性的主要部分并且其药代动力学特征是非线性时。此时，先要评价代谢物的作用，如果代谢物活性是体内活性物质总活性的主要部分并且其药代动力学特征是非线性的，就有必要同时检测母体化合物和活性代谢物的血药浓度并且对他们单独评价。
前体药物生物等效性试验的问题[6]，⑴ 测定前药是首选：生物等效性是评价试验制剂和参比制剂在药物吸收速度和程度上的异同，而测定母体药物是评价生物等效性的首选方法。因此对于前体药物，虽然具有药理活性的是代谢产物，但假如前体药物从制剂中释放并被完整吸收，同时其在体循环中的测定方法是可靠的，那么，最好的方法仍应当是以原型药（即前药）来评价两药的生物等效性。⑵ 同时测定前药和代谢物：一般很少考虑同时测定原型药和代谢物的水平用于评价生物等效性，但在有些情况下，如药物本身是无活性的前体药物，它在体内能快速转化成有活性的代谢物，而疗效和毒性主要与此代谢物有关。那么，代谢物的测定在生物等效性决策中也有重要参考价值，增加代谢物的生物等效性特征参数可以降低消费者替换使用药物的风险。⑶测定代谢产物的考虑：有些情况下，一些药物本身是无活性的前体药物，由于某种原因，如前药在生物基质中不稳定、快速代谢或分析方法学上有困难，无法测定生物样品中原形药物时；或者药物活性代谢物与药物疗效和安全性密切相关时，一般认为可采用测定生物样品中相应活性代谢物浓度的方法，进行生物等效性试验。例如：头孢呋辛酯是头孢呋辛的口服前体药物，服用后，迅速被胃肠道粘膜细胞中非特异性酯酶水解为活性成分头孢呋辛而发挥药理作用。服用后被快速代谢，体内很难测到前药原型，所以等效性试验中，只能测定血液中的代谢物头孢呋辛作为替代检测指标。类似的情况还有头孢泊肟酯、头孢妥仑匹酯、头孢特仑新戊酯、盐酸头孢他美酯等。
因此，在生物等效性研究中：⑴ 如果代谢物影响药物的安全性和有效性，则需要检测母体药物和代谢物，但生物等效性评价时以母体药物浓度作为主要判断指标。 ⑵如果代谢物的活性不清楚，一般只测定母体药物 ⑶ 母体药物体液浓度很低，代谢物为体内的主要存在形式时，一般测定代谢物 ⑷ 对于前体药物，如果母体药物可以测定时，一般测定母体药物；如果母体药物浓度非常低，检测非常困难，则测定代谢物。
总之，药物代谢物在药代动力学及生物等效性评价中发挥着重要作用，因此，本文会促进和完善对新药药代动力学和生物等效性的评价。
参 考 文 献
[1] 化学药物临床药代动力学研究技术指导原则，2005年3月，药品审评中心.
[2] 药物代谢产物安全性试验技术指导原则，2008年2月，美国FDA，药审中心最后审核.
[3] 化学药物制剂人体生物利用度和生物等效性研究技术指导原则，2005年3月，药品审评中心.
[4] FDA《口服制剂的生物利用度和生物等效性研究:一般性考虑》，FDA.
[关键词] 阿奇霉素颗粒剂;药动学;生物等效性
[中图分类号] R968[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)04(c)-0-04
Pharmacokinetics and bioequivalence of Azithromycin Granules in healthy volunteers
FENG Mo1, LI Jianhe2, CAO Junhua2, YANG Qiaofeng2, ZENG Xiaohui2, LUO Xia2, WAN Xiaomin2
(1.Department of Pharmacy, the Second People Hospital of Yueyang, Yueyang 414000, China; 2.Department of Pharmacy, the Second Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410011, China)
[Abstract] Objective: To study the pharmacokinetics and bioequivalence of Azithromycin Granules in healthy volunteers. Methods: The plasma concentrations of azithromycin in 20 healthy male volunteers were determined by LC/MS/MS methods after being orally administered with single dose of 0.5 g Azithromycin Granules by randomized crossover way; the pharmacokinetic parameters and the relative bioequivalence of the two preparations of azithromycin were calculated by DAS Ver 2.0 software. Results: The main pharmacokinetic parameters of azithromycin were as follows: Cmax were (537.4±168.2)ng/ml and (540.6±169.0) ng/ml;tmax were (2.0±0.7) h and (1.9±0.7) h;t1/2 were (31.3±11.6) h and (32.6±16.3) h;AUC072 were (4 736.7±2 408.9) ng・h/ml and(4 779.2±2 405.2) ng・h/ml; AUC0∞ were (5 578.6±2 796.3) ng・h/ml and (5 635.6±2 594.1) ng・h/ml for test preparation and reference preparation respectively. The 90% confindential interval of AUC072, AUC0∞ and Cmax of test preparation were 93.2%-104.4%, 91.8%-103.0% and 96.5%-102.2%, respectively. The relative bioavailability of azithromycin was (100.5±13.1)%. Conclusion: The results of the statistic analysis showes that Azithromycin Granules test preparation and reference preparation were bioequivalent.
[Key words] Azithromycin Granules; Pharmacokinetics; Bioequivalence
阿奇霉素(azithromycin)属新的大环内酯类抗生素,与红霉素相比,其化学性质更稳定,对革兰阴性菌作用扩大,尤其对流感杆菌作用加强,抗菌谱更广,抗菌作用更强,半衰期显著延长,分布广泛[1],常用于治疗呼吸道、泌尿生殖系统、皮肤和软组织感染等。。本实验建立了用高效液相色谱-质谱联用(LC/MS/MS)技术检测血浆中阿奇霉素浓度的方法,研究阿奇霉素颗粒剂在中国健康志愿者体内的药动学和相对生物利用度,并评价生物等效性,以期用于评价基本医疗保险药品和招标药品制剂,为临床用药提供药动学依据和质量保证。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LCMS2010液相色谱-质谱联用仪,LC-10AD VP低压四元梯度泵,CTO-10A VP柱温箱,SCL-10AD VP系统控制器,LC-MS solution工作站;WH-2微量旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);ER-182A型电子天平 (日本AND公司);TGL-16C台式高速离心机(湖南星科科学仪器有限公司);BS60 电热三用水箱(北京市医疗设备总厂)。
1.2 试药
试验制剂(T):阿奇霉素颗粒剂(四川百利药业有限责任公司,批号:090306,含量:99.8%);参比制剂(R):阿奇霉素颗粒剂(山东罗欣药业有限公司,批号:090430,含量:99.7%);规格:0.25 g/包。
罗红霉素(中国药品生物制品检定所,含量:948 U/mg);阿奇霉素对照品(中国药品生物制品检定所,含量:946 U/mg);乙腈(色谱纯,Caledon Company);甲醇(色谱纯,天津市科密欧化学试剂厂);其他试剂均为国产分析纯;水为双重蒸馏水(自制)。
1.2 受试者选择
20名健康男性志愿者,年龄(22.5±1.1)岁,体重(63.8±4.3)kg,身高(173.8±3.5)cm;受试前经询问病史、体格检查和实验室检查未发现异常。受试者既往体健,无药物过敏史,无吸烟、嗜酒及经常用药史。试验前两周内未服用任何可能影响本品吸收、代谢的药物。受试期间统一清淡饮食,不使用除试验(参比)制剂以外的任何药物,不接受烟、酒及含咖啡的饮料,避免剧烈运动。受试者试验前签署知情同意书,本试验方案经本院医学伦理委员会审核批准。
1.3 给药方法与样品采集
采用双周期自身随机交叉试验设计。20名受试者随机等分为A、B两组,每组受试者每次试验时分别服用试验制剂或参比制剂。受试者于试验前一日晚餐后,禁食不禁水12 h,次日清晨将阿奇霉素颗粒剂试验制剂或参比制剂两包倒入杯中,加适量纯净水溶解、摇匀后口服,并用总量约200 ml纯净水分次冲洗杯中残留药物并空腹口服,确保药物的摄入,并做记录。服药2 h后可自由饮水,4 h后进统一标准餐。试验期间由医护人员进行监护。分别于服药前(0 min)和服药后0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0 h由前臂肘静脉取血5 ml。20名受试者经14 d洗脱后交叉给药,同时间点取血。血样置含有肝素的离心管中,立即离心(3 000 r/min)5 min,分离出血浆,置-20℃冰箱中保存,备测。
1.4 血浆样品处理与血药浓度测定
1.4.1 色谱条件色谱柱:Thermo Hypersil-Hy purity C18色谱柱(2.1 μm×150 mm,5 μm);流动相:20 mmol醋酸铵(pH=5.2,乙酸):甲醇-乙腈-水(39∶15∶46);流速:0.2 ml/min;进样量:5 μl;柱温:45℃。
1.4.2 质谱条件电喷雾电离源(ESI),电离源电压4.5 kV,喷雾气氮气(N2),流速为1.5 L/min,干燥气体氮气流速为10 L/min。脱溶剂温度为250℃,检测器电压1.7 kV。选择性正离子监测(SIM)质荷比(m/z)为406(阿奇霉素,M+H+)和349(罗红霉素,M+H+)的带正电荷的分子离子峰。
1.4.3 血浆样品的处理精密吸取离心后的血浆0.20 ml,置2 ml离心管中,加入内标液80 μl(600 ng/ml罗红霉素),饱和碳酸钠100 μl,加入1 ml二氯甲烷,漩涡混匀萃取3 min,离心(3 500 r/min)3 min,吸取下层有机相于50 ℃水浴中挥干,残渣用100 μl流动相溶解,离心(3 500 r/min)3 min,取上清液5 μl,进样。记录色谱图,内标法以峰面积比定量。
1.5 血浆标准曲线的制备与定量下限的测定
1.5.1 标准溶液与内标溶液的配制①阿奇霉素对照品溶液的制备:精密称取阿奇霉素12.2 mg,置于100 ml量瓶中,用甲醇溶解即得标准贮备液(122.0 μg/ml),使用时稀释至所需浓度。②内标罗红霉素溶液的制备:精密称取罗红霉素11.6 mg,置于100 ml量瓶中,用甲醇溶解即得内标贮备液(116.0 μg/ml),使用时用甲醇稀释至所需浓度,作为内标。
1.5.2 线性范围与定量下限用空白血浆将标准贮备液配制成含阿奇霉素1 600 ng/ml的标准血浆样品,再用空白血浆将此标准血浆样品系列稀释成1 600.00、800.00、400.00、200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25 ng/ml的系列浓度标准血浆溶液,按照“1.4.3”项下方法操作并测定。记录色谱图,以阿奇霉素与罗红霉素的峰面积比值(Y)对血药浓度(C)进行线性回归。得回归方程:Y=0.004 2C+0.023 6(r=0.998 9);表明血浆中阿奇霉素在6.25～1 600.00 ng/ml浓度范围呈良好的线性关系,血浆中阿奇霉素定量下限为6.25 ng/ml。
1.6 方法学考察与评价
1.6.1 特异性经LC/MS/MS分析测定得到阿奇霉素和罗红霉素的质谱扫描图谱见图1,标准液、空白血样、空白血样中加入标准品和受试者服药后血浆的总离子流图分别见图2。阿奇霉素的保留时间约为 1.86 min,内标的保留时间约为 3.23 min,血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品的分离测定。
图 1 阿奇霉素(A)和罗红霉素(B)质谱扫描谱图
Fig.1 MS chromatograms of azithromycin (A) and roxithromycin (B)
1.6.2 准确度与精密度取空白血浆0.2 ml,按“1.4.3”项下方法配制阿奇霉素低、中、高3个浓度(12.50、100.00、800.00 ng/ml)的质控(QC)样本,每一浓度制备5个样品,当天进样分析,连续测定3 d,根据当日的标准曲线计算QC样本的测得浓度,并与理论浓度对比,计算测定方法的准确度及日内和日间精密度。结果在阿奇霉素血浆浓度为12.50、100.00、800.00 ng/ml时测得的日内平均回收率分别为96.48%、99.86%、99.22%,日内RSD分别为9.36%、5.15%、4.17%,日间RSD分别为10.25%、8.22%、4.70%,符合生物样品分析的方法学要求。
1.6.3 稳定性试验用空白血浆配制相当于阿奇霉素浓度为12.50、100.00、800.00 ng/ml的样品,分别在室温条件下放置0、2、4、6、12 h,在-20℃冰箱中冷冻后取出,室温融化,重复操作4次,在-20℃冰箱中放置0、5、10、20、30 d,然后在上述考察条件下取样,并按上述方法测定,计算阿奇霉素的浓度,结果样品在室温放置12 h内、4次冻融过程中、冷冻条件下放置30 d内均稳定。
1.6.5 萃取回收率配制含阿奇霉素浓度分别为低、中、高3个浓度(12.50、100.00、800.00 ng/ml)标准系列血样,各5份;按“1.4.3”项下方法操作,记录阿奇霉素和内标峰面积。另配制含阿奇霉素浓度分别25.00、200.00、1 600.00 ng/ml,内标浓度为480 ng/ml的流动相溶液,各1 ml(相当于处理血样的最后浓度),直接进样5 μl,记录阿奇霉素和内标峰面积。比较血浆样品和流动相样品的峰面积,分别计算阿奇霉素和内标的萃取回收率。结果在阿奇霉素血浆浓度为12.50、100.00、800.00 ng/ml时测得的平均回收率分别为77.51%、73.41%、72.99%,RSD分别为5.34%、6.10%、7.14%;内标的平均回收率为79.31%,RSD为8.47%。
1.7 方法学质控
用空白血浆配制浓度12.50、100.00、800.00 ng/ml的质控样品,每次测定时每个浓度取3份样品,按“1.4.3”项下方法操作(每次质控样品的测定安排在每天测定的中间时段),计算浓度,结果测定值均落在靶值的±15%范围内。
1.8 数据处理
利用DAS Ver 2.0统计软件计算药动学参数,Cmax和tmax均以实测值表示。AUC0t以梯形法计算;AUC0∞按公式计算:AUC0∞=AUC0t+Ct/λZ(t为最后一次可实测血药浓度的采样时间;Ct 为末次可测样本药物浓度;λZ为对数血药浓度-时间曲线末端直线部份求得的末端消除速率常数);t1/2用公式t1/2=0.693/λZ计算。以各个受试者服用试验制剂和参比制剂的AUC0t按下式分别计算其相对生物利用度(F)值:F= AUCT/AUCR×100%。Cmax、AUC经对数转换后进行方差分析,双单侧t检验和(1-2α)置信区间考察。
2 结果
2.1 药动学参数
20名健康受试者单次交叉口服0.5 g阿奇霉素颗粒剂试验制剂或参比制剂后的平均血药浓度-时间曲线见图3。主要药动学参数见表1。
图 3 20名健康志愿者单剂量口服阿奇霉素颗粒剂试验和参比制剂后平均血药浓度-时间曲线
Fig.3 Mean plasma concentration-time curves of azithromycin after
a single oral dose of test formulation and reference formulation
in 20 healthy volunteers
2.2 生物等效性评价
试验制剂和参比制剂的Cmax、AUC 经对数转换后进行方差分析,并进一步采用双单侧t检验和(1-2α)置信区间法进行生物等效性评价,tmax采用非参数检验法。结果表明,阿奇霉素的AUC0t、AUC 0∞和Cmax均拒绝生物不等效假设(P>0.05);试验制剂的AUC0t、AUC0∞、Cmax的90%置信区间分别为参比制剂相应参数的93.2%～104.4%、91.8%～103.0%和96.5%～102.2%。非参数检验结果显示,两制剂的tmax差异无统计学意义(P>0.05)。根据以上结果,判定两制剂生物等效。
2.3 安全性评价
整个试验过程由经GCP培训的临床医师和护士进行观察, 20 名受试者在服用试验制剂或参比制剂后均无不适主诉或亦未观察到不良事件,且均按要求完成试验。
3 讨论
阿奇霉素由于其结构中无共轭体系,只有在接近200 nm有较弱的紫外吸收,一般难以用高效液相色谱的紫外检测器进行生物样品的检测。 μg/L,并且所需血浆量大,样品预处理较为麻烦;更重要的是由于阿奇霉素为二室模型药物,其分布较快,但t1/2却很长,达30～50 h,故采用本法无法测定给药3个t1/2后血浆中阿奇霉素的浓度。李东等[15]采用HPLC-紫外检测法,由于阿奇霉素无紫外吸收,只能采用末端吸收法,故灵敏度低,最低检测限仅为50 μg/L;本研究采用LC/MS/MS法测定人血浆中阿奇霉素的浓度,该法快速灵敏,专属性强,回收率高,稳定性好,且简化了样品的处理过程,适合阿奇霉素血药浓度的测定。
。AUC0t、AUC0∞和Cmax经对数转换后,进行药物间、周期间、个体间的3因素方差分析,再以双单侧t检验进行等效性判断。结果表明,两者在不同制剂间和不同周期间差异无统计学意义(P>0.05)。Cmax、AUC0t和AUC0∞、双单侧t-检验结果表明,均thigh和tlow>单侧t0.05。试验制剂AUC0t和AUC0∞的90%可信区间均未超出参比制剂相应AUC0t和AUC0∞的80%～125%的范围;试验制剂的Cmax的90%可信区间,也未超出参比制剂Cmax 的70%～143%的范围,试验制剂与参比制剂生物等效。试验制剂对参比制剂的相对生物利用度为(100.5±13.1)%。
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关键词：富马酸酮替芬分散片，药代动力学，生物等效性
富马酸酮替芬为新型抗变态反应药物，可强效抗组胺及抑制过敏反应介质的释放。富马酸酮替芬不仅可以抑制支气管周围黏膜肥大细胞释放白细胞三烯、组胺、血小板激活因子等炎症介质，还可抑制血清、抗原、钙离子介导的中性粒细胞与人嗜碱粒细胞释放出白三烯与组胺等[1-2]。此外，富马酸酮替芬可通过调节CD细胞释放淋巴细胞活性，进而减少体内免疫球蛋白E的合成，起到抗炎效果。故该药对多种哮喘病、过敏性鼻炎及湿疹等变态反应疾病均具显著疗效[3]。。
1. 资料与方法
1.1一般资料
1.1.1 受试者
选取20例健康男性为受试者，受试前均自愿参加并签署知情同意书。20名受试者无吸烟、喝酒史，无药物过敏史与慢性病史。年龄24～34岁，平均年龄（25.3±2.4）岁，体质量56～69kg，平均（66.5±4.8）kg，身高170～181cm，平均（174.4±4.8）cm。所有受试者均经生命体征、尿常规、心电图、血常规、胸透、消化道、精神系统及肝、肾功能等全面检查正常，试验前2周内未服用任何药物。受试期间饮食清淡，禁止饮茶、咖啡，禁止剧烈活动。本实验经伦理委员会批准同意。
1.1.2 仪器
API4000型液相色谱质谱联用仪；AB104电子分析天平；色谱柱ZorbaxXBD-C18柱；GS-15R贝克曼高速离心机；TG332A微量分析天平。
1.1.3 试剂及药品
山东绿因药业有限公司生产的富马酸酮替芬分散片（规格：1mg/片，批号：110101）作为受试制剂；上江苏恩华药业股份有限公司生产的富马酸酮替芬片（规格：1mg/片，批号：120613）做为参比制剂；富马酸酮替芬对照品由中国药品生物制品检定所提供，含量>99.0%；内标物盐酸苯海拉明由中国药品生物制品检定所提供，含量>99.4%；甲醇与乙腈为色谱纯；其余为分析纯。
1.2方法
1.2.1色谱、质谱条件
色谱柱：ZorbaxXBD-C18柱（4.6mm*150mm，5μm），流动相为乙腈-水-甲酸，流速0.4mL/min，柱温为室温。
质谱条件：正离子检测，离子源：离子喷雾离子化源；离子喷射电压：500V，温度：500℃；源内气体1（GS1，N2），流速：50a.u；气体2（GS2，N2），压力：10Pa；扫描方式：多重反应监测（MRM），DP电压微：70V；碰撞气压力：5Pa；定量分析时的碎片离子M/z310M/z97（酮替芬）与M/z256M/z167（内标物）；碰撞诱导解离（CID）电压33eV（酮替芬）与25eV（内标物）。
1.2.2血浆样品处理
取0.5mL血浆，加100？L内标溶液、100？L甲醇及100？LNa2CO3溶液，旋涡混匀，离心5min（3000r/min），取30μL上清液进行HPLC-MS/MS分析。
1.2.3实验方案
采取单剂量、双周期交叉试验设计，2次试验间隔1周，将20名受试者随机分为两组，每组10人。用药前前12h进食清淡晚餐后禁食，于次日清晨口服受试制剂或参比制剂，单次服用剂量均为1mg，空腹温开水送服，服药后于室内休息。用药后2h可饮水，4h进食统一低脂标准餐。于服药前、服药后0.5、1、2、3、4、5、6、8、12、24、36h采集上肢静脉血5ml，置于无菌肝素抗凝试管内，3000r/min离心后取上层血浆，于-20℃冰箱中保存。经1周清洗期后再依据同样方法服用受试制剂或参比制剂，并于相同时间点取血。将采集的血浆采取高效液相色谱串联质谱法进行检测。
1.3 观察指标
观察两组制剂的药代动力学参数与富马酸酮替芬分散片的相对生物利用度。
2. 结果
2.1 药动学参数
将20名受试者服用富马酸酮替芬分散片与富马酸酮替芬片后的血药浓度数据应用BAPP2.0软件进行参数计算以及生物等效性分析，可见两种制剂的主要药代动力学参数比较无统计学差异（P>0.05）。具体见表1。
2.2 相对生物利用度
以富马酸酮替芬分散片与富马酸酮替芬片0-t时间曲线下面积AUC0～36计算，富马酸酮替芬分散片相对于富马酸酮替芬片的生物利用度为（107.54±12.31）%。
2.3 生物等效性评价
将富马酸酮替芬分散片与富马酸酮替芬片的主要药代动力学参数Cmax、AUC经对数转换后行交叉实验方差分析，得出ln AUC0～36与ln Cmax在制剂间比较无统计学差异（P>0.05）。进行双单侧t检验（α=0.05），AUC0～36的90%置信区间落在富马酸酮替芬片的93.9%～104.2%范围内；Cmax的90%置信区间落在富马酸酮替芬片的97.6%～108.5%范围内，富马酸酮替芬分散片的相对生物利用度为（107.54±12.31）%，由此可见，两制剂在人体内具有生物等效性。
3. 讨论
由于富马酸酮替芬制剂在口服后血浆中含量低，故紫外分光光度法与反相高效液相色谱法检测的灵敏度较低[4]。为达到更高的灵敏性，多数研究采取的是液液萃取方法，但操作起来较为复杂。故本研究采用了液相色谱-质谱联用法进行检测，其线性范围能达10～4000ng/L，故相对于紫外分光光度法与反相高效液相色谱法，其灵敏性显著上升，可使血浆中酮替芬浓度在极微量情况下也能保证高度的准确性与可靠性。而在流动相的选择上，本研究采取的是乙腈-水-甲酸，其中甲酸是有机酸，能增加酮替芬的溶解，有效降低了色谱柱的损耗，同时也增强了分析的灵敏性。
本研究采取梯形法计算AUC0～36，实测tmax、cmax，通过对药代动力学参数采取方差分析与双侧t检验，结果显示，富马酸酮替芬分散片与富马酸酮替芬片的药代动力学参数比较无统计学差异，可见两种制剂在人体内的处置情况接近。受试制剂富马酸酮替芬分散片的相对生物利用度为（107.54±12.31）%。经生物等效性评价，两种制剂在人体内分布、吸收、消除特征接近，具有生物等效性。
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【关键词】药物研发；药物代谢动力学；意义
药物代谢动力学主要是指利用数学处理的方法，对药物或者其他外源性的物质在人体中的动态变化进行定量描述，进而研究人体对药物的吸收、分布、代谢以及排泄所产生的毒理学和药理学意义。目前药物代谢动力学已经渗入到了药物治疗学、生物药剂学、毒理学等多门学科中，贯穿于药物的研发，成为了现今药物深度研究的一个重要标志。
1、药物代谢动力学在药物研发中的应用
1.1、药物代谢动力学应用于新药发现
药物在具备低毒副作用以及良好药效的同时应该具备较好的药动学的性质，比如：生物利用度和吸收好；中度的蛋白结合率；良好的溶解度；在体内的代谢物毒性低或者无毒等等。因此在新药研发的过程中，需要考虑药物在体内的药代动力学参数，并且对药物结构可能会对参数产生哪些影响进行分析，找出代谢和结构之间的规律，进而为化合物的结构优化和设计提供指导性的意见。
1.2、药物代谢动力学应用于药理学的研究
药物必须要到达靶部位，并且保持一定的浓度，和作用的部位结合产生药物-受体相互作用才能够产生应有的药理效应。药理作用的强弱和作用部位期药物浓度密切相关，例如速尿利尿剂，其作用的强度和Na+排出量、尿流量、血药浓度有着线性关系；水杨酸在体内达到50-100mg/L时具有镇痛作用，浓度大于250mg/L时具有抗风湿的作用，浓度在350-450mg/L时具有消炎作用；当浓度大于500mg/L时会出现毒性副作用；当浓度在1600mg/L-1800mg/L时会导致患者中毒死亡。通过药物代谢动力学的研究可以对药物的药理作用进一步地研究，从而知道药物在临床上的用药。
1.3、药物代谢动力学应用于制剂学的研究
好的药物剂型是安全、有效、均匀、稳定的，利用药物代谢动力学能够有效地筛选和评价药物的急性，从而帮助临床合理地用药，确保临床用药的安全。靶向制剂、缓控释制剂现在已经成为了国内外研究的热点，他们都具有维持药物有效的浓度、减少用药的次数、降低药物的毒副作用、将药物靶向到作用部位的有点，利用制剂的药物代谢动力学研究，我们可以对药物的各种剂型进行评价，观察其是否达到了预期的目的。
1.4、药物代谢动力学应用于中药现代化的研究
中药现代化的一个非常重要的组成部分便是中药复方的药物代谢动力学研究，其主要是对中药的单方、组分、活性成分以及复方在人体内的排泄、代谢、分布、吸收等动态规律进行研究，通过代谢动力学的研究有利于对方剂的组成、某些中药其作用机理进行阐明。中药复方中的每一味药其本身就是一个复方，通过多靶点、多环节、多途径进行协同作用，而真正起作用的药物可能不一定是存在于单味药或者中药复方中的化合物，极有可能是其在人体内经过代谢后所转化的新化学物质。因此通过动力学的研究能够认识到真正起作用的化学物质，能够阐明活性成分在人体内代谢、分布以及吸收全过程所发生的化学变化。
1.5、药物代谢动力学应用于毒理学研究
与毒性试验结合，利用药物代谢动力学能够对不良反应发生的规律以及药物的毒性进行探讨。药物毒代动力学是临床试验于非临床试验之间的纽带，主要是找出比较全身毒性、暴露和毒代动力学数据于时间的关系。利用毒代动力学可以阐明重复给药对代谢过程的影响；；可以用于对在试验中药物毒理学发现或者改变的解释，从而为临床前的毒性试验提供依据；通过对代谢产物的研究以及揭示出毒性的作用机制。
1.6、药物代谢动力学应用于临床用药
药物代谢动力学的研究主要是为了对药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄规律进行阐述。因此其首先要研究的就是比较在动物体内和人体内的代谢物是不是一致；其次是对于在人体内产生的活性代谢产物也应该进行药物代谢动力学的研究。利用药物之间相互作用的动力学研究，阐述在相关适应症治疗的条件下，药物之间的相互作用对药物在体内代谢动力学规律的影响。上述研究是为临床制定合理的用药方案提供依据，同时也是为了能够对药物的毒性反应提供合理的预测。临床给药方案在设计的过程中，多剂量的给药间隔时间以及药物的剂量都需要在药物代谢动力学的基础上进行设计。若是给药剂量太少，则药物无效；若是给药剂量太大，则可能会引起中毒；若是给药间隔时间很短，则很容易造成药物在体内蓄积；若是给药时间间隔过长则体内药物的有效血药浓度不能维持。
2、展望
在药物研发的过程中药物代谢动力学的地位越来越重要，在药物研发的各个阶段都应该进行多学科间的综合讨论以及相关信息的反馈，通过研究深入地认识药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄过程，从而阐述药物的安全性与有效性，帮助临床合理用药，预防不良反应，指导医师正确用药。
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